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发布时间:2023-02-11 19:05:57 作者:知网小编 来源:www.it54.cn
常用的蛋白质分离鉴定的方法有哪些? 让人们感兴趣的目标蛋白可以从不同来源的样品获得。 对于临床诊断,蛋白质可以从患者的细胞或组织得到,对于实验研究,可来自微生物或昆虫、脊椎动物及植物的细胞系。
不同种类的蛋白质在分子大小方面有一定的差别,可用一些简便的方法,使蛋白质混合物得到初步分离。 透析在纯化中极为常用,可除去盐类(脱盐及置换缓冲液)、有机溶剂、低分子量的抑制剂等。 透析膜的截留分子量为5000左右,如分子量小于10000的酶液就有泄露的危险,在纯化中极为常用,可除去盐类、有机溶剂、低分子量的抑制剂等。
蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入秀析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行。 此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短。
蛋白质的制备一般分为以下四个阶段:选择材料和预处理,细胞的破碎及细胞器的分离,提取和纯化,浓细、干燥和保存。 微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定。