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发布时间:2022-08-16 22:17:03 作者:知网小编 来源:www.it54.cn
RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用检测细胞、组织中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特点基因的cDNA序列等。 如果用于定量检测,就是上文提到的qPCR, 此次新冠病毒核酸检测荧光PCR技术,就是基于此。
新冠疾病作为一种高传染性疾病,对其病原体的检测是诊疗病人的关键。 目前检测传染病的策略包括两点,检测病原体本身,或检测人体为了抵抗病原体而产生的抗体,也就是病原学检测和血清学检测。 例如,在冠状病毒中,针对其刺突糖蛋白,包膜蛋白和核衣壳蛋白的检测,就属于病原学检测中的抗原检测;而针对其基因组RNA的检测则是病原学中的核酸检测。 病毒入侵人体,一般会激活机体的特异性免疫,产生抗体进行抵御,针对这些特异抗体的检测则属于血清学检测。 这里我们从分子生物学的角度,将上述检测类型重新分成核酸检测和蛋白检测(表1)。 不过这里要注意的是,抗原不一定都是抗体,细菌上的脂多糖LPS就不是蛋白。 检测方法上,我们将介绍qPCR、等温扩增和基于CRISPR的三种核酸检测技术。
基于抗体与抗原的特异性识别反应,目前已经开放了一系列免疫检测方法,最常见的如Western blot;临床上则多采用胶体金检测试纸。 目前已经有针对新型冠状病毒特异IgM和IgG的检测试纸,用于进一步确认病人的感染情况。
目前针对新型冠状病毒的检测主要是采用的是qPCR (Real time quantitative PCR, 实时荧光定量PCR)中的Taqman水解探针法。 2020年1月21日,中国疾控中心提供的用于新型冠状病毒核酸检测的引物和探针序列(图3)。