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发布时间:2022-04-01 16:12:06 作者:知网小编 来源:www.it54.cn
杂交液的成分主要影响了核酸杂交的复性动力学和热稳定性。 杂交液的基础成分为:Denhardt’s溶液(Ficoll,BSA,PVP),异源核酸(如鲱精子DNA/tRNA/竞争DNA),磷酸钠,EDTA,SDS,盐离子,甲酰胺和硫酸葡聚糖,以及杂交探针。
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测,与免疫组化技术的结合应用,能将 DNA 、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。 1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交,此后得益于分子克隆技术的发展,及不同探针标记系统和检测系统的应用,大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。
③RNA 杂交体稳定性高,所以探针在杂交反应中产生的信号较DNA 探针强,等优点。 核酸的分子杂交可分成液相杂交和固相杂交两大类。 液相杂交是将待检测的核酸样品和同位素标记的杂交探针同时溶于杂交液中进行反应,然后分离杂交双链和未参加反应的探针,用仪器计数并通过计数分析杂交结果。
1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交,此后得益于分子克隆技术的发展,及不同探针标记系统和检测系统的应用,大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。 基于地高辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。